一、背景：抗體工程與化學修飾的挑戰

抗體作為重要的治療與診斷工具，因其對特定抗原的高親和力與特異性，在生物醫藥領域應用廣泛。通過化學修飾可進一步拓展抗體功能，例如構建雙特異性抗體、抗體-藥物偶聯物或功能化免疫脂質體等。然而，傳統的化學修飾方法常面臨位點選擇性差、產物異質性高、工藝復雜等挑戰，難以實現類似酶促反應的精準控制。發展高選擇性、高效率的抗體定點修飾技術，對于提升相關制劑的質量、開發新型診斷與治療工具具有關鍵意義。

二、策略：肽引導的鄰近驅動抗體定點乙酰化

近期發表于《JACS》的研究報道了一種創新的抗體定點修飾策略。該策略利用一種能特異性結合人免疫球蛋白G Fc結構域的合成肽段（Fc-III肽），通過鄰近驅動機制，實現Fc區單個賴氨酸殘基（Lys248）的精準乙酰化。

1. 機制設計：研究者對已知的Fc結合肽Fc-III進行工程化改造，在其特定位置引入帶有苯酯基團的非天然氨基酸。改造后的肽段仍能高親和力結合IgG Fc的鉸鏈區，并將其攜帶的活性基團精確定位在Lys248附近。利用鄰近效應，賴氨酸殘基的ε-氨基親核攻擊苯酯，完成乙酰基轉移，從而實現對IgG的位點特異性標記。

2. 反應特性：該反應條件溫和（37°C，中性pH），無需額外催化劑，且具有高度選擇性。動力學研究表明，反應快速高效，同時苯酯在溶液中的快速水解特性減少了非特異性副反應，保證了修飾的專一性。質譜分析證實，修飾位點高度集中于Lys248，且對抗體Fab區的抗原結合功能無顯著影響。

三、應用：精準修飾在診斷試劑開發中的前景

該定點修飾技術為開發均一性高、性能穩定的診斷試劑提供了強大的平臺。其應用潛力在免疫脂質體與雙特異性抗體復合物的成功構建中得到初步驗證，尤其為開發基于夾心法原理的高性能 IgG Sandwich Assay 試劑盒 奠定了技術基礎。

1. 構建均一性檢測探針：利用該技術，可對檢測抗體進行定點、定量標記。例如，將報告分子（如熒光染料、酶）精準偶聯至抗體的Fc區特定位點，能夠確保每個抗體分子攜帶的報告分子數量均一，從而大幅減少傳統隨機標記導致的批次間差異和信號背景噪音。這對于提升 夾心法檢測試劑盒 的靈敏度、重復性和檢測線性范圍至關重要。

2. 開發高性能雙特異性檢測抗體：該技術可用于構建結構明確的雙特異性抗體復合物。在 夾心法檢測 中，雙特異性抗體可被設計為同時捕獲目標抗原和報告系統，簡化檢測步驟，提高檢測效率與特異性。研究團隊成功構建了由抗HER2與抗CD3抗體組成的雙特異性復合物，證明了該策略在構建功能性多價抗體分子的可行性。

3. 用于固相載體的定向偶聯：通過該定點修飾技術，可將抗體定向偶聯至微粒、磁珠或芯片等固相載體表面。實現抗體功能片段朝向反應體系的定向固定，有助于暴露其抗原結合位點，顯著提高 夾心法 中捕獲步驟的效率與一致性。

四、總結與展望

本研究發展的肽引導鄰近驅動乙酰化策略，為抗體等高價值生物大分子的精準化學修飾提供了創新方法。該方法具有位點特異性高、反應條件溫和、對抗體天然功能影響小等顯著優勢。將其應用于診斷領域，特別是用于開發新一代 IgG Sandwich Assay 試劑盒，有望實現檢測抗體標記的均一化、標準化與高性能化。這將直接推動免疫診斷試劑在靈敏度、特異性和穩定性方面的整體提升，為精準醫療和臨床檢驗提供更可靠的工具。未來，進一步拓展該技術的普適性，將其應用于更多抗體亞型及生物標志物的檢測體系開發，具有廣闊的臨床應用前景。

基于肽引導的IgG位點選擇性修飾及其在診斷應用中的潛力-南京優愛(UA BIO), 重組蛋白專家