在免疫系統的精密布局中，輔助性T細胞17（Th17）作為CD4+T細胞的重要亞群，扮演著抵御細胞外細菌和真菌感染的關鍵角色，同時也是自身免疫疾病的強力推動者。無論是研究黏膜免疫、感染防御，還是探索自身免疫病的發病機制，掌握體外Th17細胞極化技術都成為核心技能！

面對復雜的細胞因子組合和精細的調控網絡，你是否對Th17極化感到無從下手？放心，這篇"Th17極化指南"將為你揭開所有謎團，帶你從基礎到精通，全面掌握人與小鼠Th17極化的精髓！

第一部分：理論基石——Th17細胞的雙面特性

1.Th17細胞是什么？

Th17細胞是近年來備受關注的CD4+T細胞功能亞群，其特征性分泌IL-17A、IL-17F、IL-22等細胞因子。它們是黏膜免疫的"守護者"，通過招募中性粒細胞和維持上皮屏障完整性，構筑起抵御真菌和細胞外細菌感染的第一道防線。然而，當調控失常時，它們又會轉化為"炎癥風暴的引爆者"，驅動多種自身免疫性疾病的發生發展。

2.為什么要進行體外Th17極化？

機制探索：解析TGF-β、IL-6等關鍵因子在Th17分化中的協同作用機制

疾病研究：獲取Th17細胞用于研究銀屑病、多發性硬化、類風濕關節炎等自身免疫病

藥物篩選：建立Th17相關疾病模型，篩選靶向Th17通路的新型治療藥物

免疫平衡：研究Th17/Treg平衡在免疫穩態中的調控作用

第二部分：核心庫——極化因子全解析

Th17分化的調控網絡相對復雜，其極化條件需要精確的細胞因子組合和適當的抑制劑使用。

"經典三要素"信號通路：

? TCR激活信號：通過抗CD3/CD28抗體提供T細胞活化的基礎信號
? TGF-β+IL-6協同啟動：TGF-β與IL-6的組合是啟動Th17分化的核心驅動力，誘導關鍵轉錄因子RORγt表達
? 細胞因子強化網絡：IL-1β和IL-23可進一步促進Th17細胞的增殖和功能穩定

精準調控策略：

? 抗體阻斷方案：使用抗IFN-γ和抗IL-4抗體，有效消除Th1和Th2分化的競爭干擾
? 信號通路調節：通過適當抑制STAT1/STAT4/STAT5信號，為Th17分化創造有利環境

這套經過優化的極化體系能夠高效誘導初始CD4+T細胞分化為功能成熟的Th17細胞，其典型特征包括大量分泌IL-17A、高表達RORγt和CCR6等表面分子，為深入研究Th17生物學功能提供理想的實驗平臺。

第三部分：實戰操作篇——小鼠與人Th17極化方案

小鼠Th17極化方案

1.細胞培養

用10?µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2?µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔細胞培養板過夜;

第二天洗板封閉后加入分選后的CD4+ T細胞，培養基用RPMI-1640 加10 μg/mL anti-IFN-γ,10 μg/mL anti-IL-2, 10 μg/mL anti-IL-4, 50 ng/mL IL-6, 30 ng/mL TGF-β1, 10 ng/mL IL-23 , 50 ng/mLIL-1β, 55 μM β-巰基乙醇及10 % FBS培養;

48 小時開始每 12 小時觀測細胞濃度，如果細胞密度很大，則將細胞分到新的孔中，并加以上培養液刺激（不用添加CD3,CD28抗體刺激）;

培養5天后收集細胞細胞，將胞密度控制為10?/ml，用10ng/ml PMA,1μg/ml Ionomycin,10μg/ml Brefeldin A共處理5h。

陰性對照組Th0細胞：用10?µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2?µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔細胞培養板過夜;

第二天洗板封閉后加入分選后的CD4+ T細胞，維持培養基為RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巰基乙醇，10μg/mL anti-mouse IFNγ，10μg/mL anti-mouse IL-4 培養;

48 小時開始每 12 小時觀測細胞濃度，如果細胞密度很大，則將細胞分到新的孔中，并加以上培養液（不用添加 anti-mouse CD3ε和anti-mouse CD28 mAb）培養5天。

2、流式檢測

收集細胞后用流式檢測抗體染色上機

BD Mouse IL-17A PE (clone: TC11-18H10.1)

Th17 Polarization Kit, Mouse/小鼠Th17極化套裝_UA090020_優愛(UA BIOSCIENCE)

B. 人Th17極化方案

1、細胞培養

用5?µg/ml CD3 抗體包被96孔細胞培養板過夜，第二天洗板封閉后加入用CD4 Nanobeads, human（S0B5740）分選后的CD4+ T細胞，培養基用RPMI-1640 加10 μg/mL IFN-γ抗體，10 μg/mL IL-4 抗體，30 ng/mL human IL-6, 10 ng/mL TGF-β1,20 ng/mL IL-23 ,20 ng/mL IL-1β, 55 μM β-巰基乙醇，1?µg/ml CD28抗體及10 % FBS培養;

48 小時開始每 12 小時觀測細胞濃度，如果細胞密度很大，則將細胞分到新的孔中，并加以上培養液刺激（不用添加CD3,CD28抗體刺激）;

培養5天后收集細胞細胞，將胞密度控制為10?/ml，用10ng/ml PMA+1μg/ml lonomucin，10μg/ml Brefeldin A共處理5h。

陰性對照組Th0細胞: 用5?µg/ml anti-human CD3 mAb包被96孔細胞培養板過夜;

第二天洗板封閉后加入分選后的CD4+ T細胞, 培養基用RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巰基乙醇, 10μg/mL Anti-human IL-4, 10μg/mL Anti-Human IFN-γ, 200U/ml IL-2 , 1?µg/ml anti-human CD28 mAb培養;

48 小時開始每 12 小時觀測細胞濃度，如果細胞密度很大，則將細胞分到新的孔中，并加以上培養液刺激（不用添加CD3,CD28抗體刺激）培養5天。

2、流式檢測

收集細胞后用流式檢測抗體染色上機

抗體貨號 Thermo 25-7179-42 IL-17A Monoclonal Antibody (eBio64DEC17), PE-Cyanine7

Th17 Polarization Kit, Human /人Th17極化套裝_UA090019_優愛(UA BIOSCIENCE)